Question

1.Okresl sposob uzyskiwania DNA. 2.Wyjasnij role wektora, podaj przyklady wektorow. 3.sposoby wprowadzania dna do komorek bez uzycia wektora. 4.wykaz roznice miedzy metoda PCR a klonowaniem.

Answer 1

1. Metoda PCR (Polymerase Chain Reaction - reakcja łańcuchowa polimerazy)

Umożliwia klonowanie DNA. Nici DNA rozdziela się pod wpływem wysokiej temperatury (ok. 80st. C) Aktywną polimerazą w tej temperaturze jest polimeraza DNA termofilnej bakterii, która naturalnie żyje w gejzerach (thermophilus aqua), dodatkowo w zestawie PCR obecne są trifosforany nukleozydów i startery. Rozdzielenie nici trwa krótko (2-3 min), następuje synteza nowych nici w niższej temperaturze i znowu podnosi sie temperaturę itd.

 

2.Wektor to czynnik służący do przenoszenia obcego materiału genetycznego do komórki (pośrednio). Wektory:

- plazmidy

- bakteriofagi

- wirusy

- liposomy

 

3. - strzelba genowa - dotyczy komórek ze ściana komórkową. Do roztworu komórek dodaje się wolfram i fragmenty DNA które chcemy wprowadzić. Poprzez potrząsanie kuleczki wolframu dziurawią ścianę komórkowa, a przez powstałe dziury wnikają obce geny do wnętrza komórki

     - elektroporacja - podobnie jak przy strzelbie genowej ale ściana jest dziurawiona nie przez wolfram a przez pole elektryczne

   - metoda podobna do in vitro, wprowadzenie obcego genu do komórek zwierzęcych za pomocą mikrostrzykawki (do komórki jajowej) powstaja transgeniczne zwierzeta

 

4. PCR - klonowanie tylko DNA, będącego poza komórką

    klonowanie - klonowanie całego organizmu, komórki,